親水色譜柱是一種專門設計用于分離親水性和極性化合物的色譜柱。利用固定相上的親水性基團與樣品中的極性基團之間的相互作用,實現對極性化合物的有效分離。其工作原理基于親水作用和可能的離子交換作用。在分離過程中,水相固定相上的親水性基團與待分離物質中的極性基團發(fā)生相互作用,從而實現物質的分離和純化。
1、分離原理d特:
分配平衡與親水相互作用:利用樣品在流動相和固定相中的分配平衡,樣品中的極性官能團與固定相表面進行親水相互作用。其核心思想在于利用高乙腈低水含量的流動相與極性固定相的組合,通過按照親水性由小到大的順序梯度洗脫分析物。
2、固定相特性:
極性強:親水作用色譜柱的固定相是親水的,并且通常在一定pH范圍內是帶電荷的。親水性越強的化合物,被保留的時間越長。常見的固定相類型有純硅膠柱、氨基柱、二醇基柱、酰胺基柱等。
耐水性要求高:專為親水作用色譜設計的色譜柱,對固定相的耐水性要求更高,否則會因固定相的水解出現基線噪音大、色譜柱壽命短等問題。例如,純硅膠柱有固定相不易流失的優(yōu)點,在使用CAD、ELSD和LC-MS檢測器時,受歡迎;氨基柱特別適合碳水化合物(糖類)分離。
3、流動相特點:
有機相比例高:流動相中有機相的比例較高,而水的比例相對較低。典型的HILIC分離條件中,流動相中水的含量通常在3%至40%之間波動。當水的含量超過40%時,保留效果往往會減弱。
水膜形成:普遍認為HILIC流動相中的水會被吸附到極性固定相的表面形成水膜,然后分析物在水膜和流動相之間進行液液分配作用,加上極性官能團和固定相之間的氫鍵作用力、離子官能團之間的靜電作用力等,實現被分析物的保留。水膜的作用非常重要,所以HILIC流動相中至少含有3%的水。
4、分離優(yōu)勢:
改善強極性物質保留行為:親水作用色譜是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強極性物質保留行為的色譜技術。它能夠成功提高對極性非常強的物質的保留,為包含極性物質和可離子化合物的混合物提供正交于反相色譜的獨立分離模式。
適用于多種化合物:對于強極性和親水性的小分子物質、堿性化合物以及一些難以在反相色譜中保留的化合物,親水作用色譜具有較好的分離效果。
5、應用范圍廣:
復雜樣品的分析:親水作用色譜技術以其d特的分離模式和優(yōu)勢,在復雜樣品的分析中展現出巨大潛力??捎糜谒幬锓治?、生物化學、環(huán)境監(jiān)測等領域。
與質譜聯用:由于流動相中有機相比例高,這樣的流動相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質譜(ESI-MS)的靈敏度。