離子交換色譜是指離子交換色譜柱的固定相中含有帶電基團(tuán),這些帶電基團(tuán)通過靜電相互作用與樣品中帶相反電荷的離子結(jié)合,如果流動(dòng)相中存在其它帶相反電荷的離子,當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后,樣品離子便與流動(dòng)相離子相互競(jìng)爭(zhēng)固定相表面的電荷位置,并因競(jìng)爭(zhēng)力的差異使樣品組分得到分離。
離子交換色譜柱的優(yōu)點(diǎn)是:
1、具有開放性支持骨架,大分子可以自由進(jìn)入和迅速擴(kuò)散,故吸附容量大。
2、具有親水性,對(duì)大分子的吸附不大牢固,用溫和條件使可以洗脫,不致引起蛋白質(zhì)變性或酶的失活。
3、多孔性,表面積大、交換容量大,回收率高,可用于分離和制備。
主要保養(yǎng)方法如下:
(1)首先在開始使用系統(tǒng)以前檢查柱子有否微生物生長(zhǎng),否則柱子會(huì)堵塞,柱壓會(huì)升高到無法接受的水平。然后,不接檢測(cè)器,正向安裝色譜柱,使用純甲醇以0.6ml/min流速?zèng)_洗約5倍柱體積。
(2)再連接檢測(cè)器,用純甲醇以0.6ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積。
(3)然后使用去離子水以0.6ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積。
(4)好再確保連接好保護(hù)柱(多使用相應(yīng)柱制造商針對(duì)性提供的保護(hù)柱),再用選用的洗脫液以0.6ml/min流速平衡1h以上,進(jìn)樣檢測(cè)。同樣,若洗脫液中含有緩沖鹽類,在用分析洗脫液平衡之前,先用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)析出。
(5)分析完畢,凈化程序基本同C18柱,先用去離子水以0.6ml/min流速?zèng)_洗約20倍柱體積→然后用甲醇以0.6ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積,純甲醇飽和后→密封保存即可。(注意:一定要確保在柱子內(nèi)沒有緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下保存色譜柱。)
(6)長(zhǎng)時(shí)間保存后重新使用,重復(fù)上述(1)~(5)即可。
(7)使用并正確處理完畢,入庫(kù)保存于防塵環(huán)境下,登記備案。