陰陽離子交換色譜柱的色譜行為
磺酸基陽離子交換固定相是一種常見的陽離子交換固定相,離子交換功能基為苯磺酸,通常將其健合在有機聚合物基質(zhì)(如苯乙烯-乙基乙烯苯)或硅膠基質(zhì)上,前者耐酸堿,常用于離子色譜法分析無機陽離子,后者機械性強,常用于普通HPLC分析有機化合物陽離子。
以硅膠為基質(zhì)的磺酸基陽離子交換固定相簡稱為SCX,功能基團(tuán)為大多為苯磺酸。目前市面上有多種品牌,pH適用范圍一般為2~8,磺酸基均以離子型存在,為強陰陽離子交換色譜柱。本文主要探討組分在SCX柱上的保留行為。
基于疏水作用的色譜行為
SCX固定相除磺酸基陽離子交換位點外,還有苯基這一疏水作用位點,其保留作用類似于苯基固定相,主要是疏水作用和與含雙鍵組分的π-π相互作用。
甲苯在SCX柱上的保留行為。甲苯作為一種電中性的強疏水性化合物,與固定相之間不存在離子交換作用,也不存在與極性磺酸基團(tuán)間的親水相互作用,甲苯的保留,可以視為與固定相上苯基相互作用的結(jié)果,其保留隨著流動相中有機相比例增大而減小,也與疏水作用色譜原理吻合。
對于疏水性強的陽離子化合物,該疏水作用會成為組分保留的一種重要的方式之一,有時這種作用甚至?xí)娪陔x子交換作用。
陰陽離子交換色譜柱既有聚合物基質(zhì)色譜柱也有硅膠基質(zhì)色譜柱。然而,不像在反相的領(lǐng)域硅膠柱占絕大部分占有率,離子交換模式中聚合物色譜柱和硅膠色譜柱使用頻率相近。陰陽離子交換色譜柱在蛋白質(zhì),核酸等生物化學(xué)領(lǐng)域被廣泛利用。絕大多數(shù)重組蛋白純化都要用到離子交換。離子交換色譜的基礎(chǔ)是高分辨率,可以直接放大規(guī)模應(yīng)用在工業(yè)上,柱再生容易,還可以使蛋白濃縮。