1.使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng)，確保系統(tǒng)干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。

2.取用色譜柱時避免磕碰掉落。

3.將丁基疏水色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標(biāo)明正確流向。

4.在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5mL/min。

5.當(dāng)溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上（這樣可以避免氣泡進(jìn)入檢測系統(tǒng)，并且可快速達(dá)到基線平衡）。

6.重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規(guī)分析時所使用的流速。

7.參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩(wěn)定。

8.測試丁基疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請廠家部門尋求支持，使用合適的濃度與進(jìn)樣量。柱效結(jié)果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài)，需要進(jìn)行故障排查。當(dāng)使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時，建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬，包括：使用檢測器微量流通池，減少進(jìn)樣器loop環(huán)體積，使用較小內(nèi)徑（如0.005''或0.12mm）的系統(tǒng)管路。并確保管路與丁基疏水色譜柱連接恰當(dāng)、無死體積。當(dāng)使用小顆粒填料（如2.5μm）短柱進(jìn)行快速分離時，需要考慮以下因素：

1.確保管路丁基疏水色譜柱連接恰當(dāng)、無死體積，盡量優(yōu)化系統(tǒng)減少譜帶展寬；

1.提高采樣頻率至10點(diǎn)/秒以上；

3.較小粒徑的色譜柱產(chǎn)生的柱壓較高，而較小粒徑要達(dá)到*色譜效率所需的線速度較高，請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實(shí)際情況調(diào)節(jié)流速；

4.可使用較高的柱溫來補(bǔ)償小顆粒造成的壓力升高，例如40?C。使用雜化顆粒反相色譜柱時，可使用45?C或更高。